SRSV/3T3小鼠SRSV轉化的3T3細胞

細胞名稱:    有鐵    SRSV/3T3小鼠SRS術用V轉化的3T3細胞

種(zhǒng)屬來源:   &n和訊bsp;    小鼠

組織來源:        3T3細胞女道

細胞形态:     &愛電nbsp;  圓形

生長(cháng)特性:       &nbs金校p;貼壁生長(cháng)

培 養 基:        關機;RPMI-1640，90%；FBS，10數機%。

生長(cháng)條件:       &nbs大件p;氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃,&nb影車sp;

傳代方法:     雨他   1：2至1：6，每周少朋2次。

凍存條件:   &nbs知間p;    90計的% 完全培養基+10% DMSO，液氮儲存

支原體檢測:   &n分個bsp;  陰性

特點和簡介
這(zhè)株細胞是NIH/3T3細胞用SRS小鼠腹水瘤無細胞提取物感染視們并在體外傳代。 在感染過(guò)的NIH/3T3細胞的細胞質中發(f站個ā)現了A型和Ｃ型病毒顆粒。 發(fā)現細胞票歌中有逆轉錄酶和自由的白血病病毒前病毒-DN低微A。 用這(zhè)個培養細胞對(duì)BA唱就LB/c裸鼠進(jìn)行皮下接種(zhǒng)，誘導生成(chén購可g)纖維肉瘤。

SRSV/3T3小鼠SRSV轉化的3T3細好大胞 接受後(hòu)處理
1) 收到細胞後(hòu)，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片子議發(fā)給我們。

2) 請先在顯微鏡下确認細胞生長(cháng) 狀态，去掉封口膜并將(時但jiāng)T25瓶置于37℃培養地匠約2-3h。

3) 棄去T25瓶中的培養基，添加聽黃 6ml本公司附帶的完全培養基。

4) 如果細胞密度達80%-90%請及 麗資時(shí)進(jìn)行細胞靜兒傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的完全日服培養基。

5) 接到細胞次日，請檢查細胞是 否污染，很土若發(fā)現污染或疑似污染，請及時(信國shí)與我們取得聯系。

培養操作
1）複蘇細胞：將(jiāng)含有 1mL 細胞懸液的凍存管在服哥 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000R一綠PM 條件下離心 4 分鍾，棄去得要上清液，補 加 1-2mL 培養基後(hòu)吹勻。然後(hòu)將(jiān快有g)所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過(guò)夜（或將(jiāng) 細視雜胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培什制養過(guò)夜）。**天換液并 檢查細喝微胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進(j空數ìn)行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 舊開1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM刀員 EDTA）于培養瓶中，置于 37℃快刀培 養箱中消化 1-2 分鍾，然後(hòu)在顯微鏡下體錢觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操窗還作台，輕敲幾下培養 瓶後(hòu)加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕風火輕打勻後(hòu)吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鍾，棄去刀金上清液，補加 1-2mL 培養液後(hòu)吹勻。

4. 將(jiāng)細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養一門基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀态良好(hǎo)時(sh對文í)，可進(jìn)行細胞凍存。下面(可西miàn) T25 瓶爲類；

1. 細胞凍存時(shí)，棄去培養基後(hòu)，微舞SRSV/3T3小鼠SRSV轉化的3T3細胞話自 細胞變圓 脫 落後(hòu)，加入 1ml 含血清的培好新養基終止消化，可使用血球計數闆計數。

2. 4 min 1000rpm 空國離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 D民訊MSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度爲 10%，分舊細胞密度不低于1x106/ml件吧，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好(hǎo)标識。

3. 將(jiāng)凍存管置于程麗身序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時(shí)以後(hòu朋關)轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培養注意事(shì)項
1. 收到細胞後(hòu)首先觀察細胞瓶是否完好(hǎo)，培養小拿液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現 象發(fā)生請男頻及 時(shí)和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說(shuō)明技也書，了解細胞相關信息，如細胞形态、所能風用培養基、血清比例、所 需細胞因子 等，确保細胞培養條件一緻。若由美光于培養條件不一緻而導緻細胞出現問 題，責任由客戶自行承擔。信間

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面(miàn)，顯微鏡下觀察細胞狀态。因運生北輸問題貼壁細胞會(huì)有少量 從瓶說農 壁脫落，將(jiāng)細胞置于培養箱内靜置培養厭湖 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(s司聽hí)多數細胞均 會(huì)貼壁，若細胞仍不能(néng)貼壁請用台盼藍 染慢見色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將(j人為iāng)細胞離心後(hòu)用新鮮培養基再次子紅貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活 力，請拍下 照片畫廠及時(shí)和我們聯系，信息确認後(hòu)我們爲您再免費寄送一次。

4. 靜置細胞貼壁後(hòu)，請將(jiāng)細胞們資瓶内的培養基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常制可培養，待細 胞彙 合度  玩員;80%左右時(shí)正常傳代。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶内多餘的培養基可收集備用，畫做細胞 傳代時(shí)可以 一定比例和子這客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸适應培養條件信關。

6. 建議客戶收到細胞後(hòu)前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀行吃态，便于和我司技術 部 溝通交流。由術影于運輸的原因，個别敏感細胞會(huì)出現不穩定的情況我煙，請及時(shí)和我們聯 系，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術人員**器匠回訪直至問題解決。

7.SRSV/3T3小鼠SRSV轉化的3T3細胞 該細胞僅供科研車日使用。